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RNA提取逆转录
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RNA提取逆转录
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SDS-10242
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服务介绍:

细胞中的RNA可分为信使RNA、转运RNA和核糖体RNA三大类,不同组织总RNA提取实质就是将细胞裂解,释放出RNA,并通过不同方式去除蛋白、DNA等杂质,最终获得高纯RNA产物的过程。再在逆转录酶的催化下,随机引物、oligo(dT)或基因特异性引物的引导下合成互补的DNA (complementary DNA,cDNA)。

项目

规格

待测基因数

价格(植物样本*2)

动物样本RNA提取逆转录

/样

1-10个基因

39

/样

11-20个基因

80

/样

21-30个基因

98

/样

31个以上基因

咨询

 

实验流程:取材-RNA提取-测浓度-逆转录成cDNA其中mRNA、lncRNA、circRNA为普通逆转录;

miRNA采取特异性逆转录(需提供基因名称和种属,方便设计引物用于特异性逆转录 ),默认做茎环法的逆转录,如需做加尾法逆转录请特别备注说明。


送样运输要求:

1.样品处理

a)动物组织:常规组织100mg,脂肪组织,结缔组织,纤维化组织适当增加。将组织剪切成合适大小后(建议组织块长宽高均不大于0.5 cm),然后迅速完全浸泡于5~10倍体积的RNAsolid™试剂中。(注意:已浸入RNAsolidTM试剂中的组织经平衡一段时间后,可从溶液中取出,切成更小的组织块,再重新放回RNAsolidTM试剂中;有些比较弱的液体渗透性组织如骨头等,不适合用RNAsolidTM试剂进行RNA保护。)

b)植物组织:新鲜的叶、果肉、种子最少100 mg。将嫩叶,嫩茎组织切成合适的大小(建议长宽高均不大于0.5 cm)后,然后迅速完全浸泡于5~10倍体积的RNAsolidTM试剂中。(注意:某些植物组织天生具有的屏障,如叶子表面的蜡层可阻碍RNAsolidTM试剂的渗透,对于此类组织,通常需破坏这些屏障层以允许溶液的浸透。)

c)细胞等样本:收集不少于10^6个细胞沉淀(用PBS清洗1-2次),干冰运输。

d)酵母、细菌等样本:离心弃上清,收集一定量的菌体沉淀,干冰运输。

e)全血:最少1 mL新鲜血液EDTA抗凝管,干冰运输。

f)血清或血浆:最少1 mL,干冰运输。

g)RNA样品 OD260/280为1.8-2.0,浓度≥100 ng/μL,体积≥20μL,干冰运输。


2.样品保存及运输

加入有RNAsolidTM试剂的样本可在37℃保存1~2天,2天以后部分组织中的RNA会开始降解。室温(25℃)稳定保存1周,不会有明显的RNA降解发生。大部分样品置于RNAsolidTM试剂中,4℃条件下可稳定保存1个月,不会有明显的RNA降解发生。长期存放可先将保存在RNAsolidTM试剂中的样本4℃浸透过夜,然后将RNAsolidTM试剂吸出弃去,再将样本放入-20℃或-80℃长期稳定保存3~5年。

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